第8卷第20期·总第100期 2010年10月·下半月刊
181
盐酸普鲁卡因实验合成条件的改革
刘 冰 蔡小华 湖南省怀化医学高等专科学校（418000）
摘要：目的 针对目前很多高校学生做盐酸普鲁卡因合成实验时，实验结果几乎为零的现象，本文针对实验过程中的部分条件进行了改革，
提高了产品的收得率和学生实验的积极性，同时教学效果也得到了提高。方法 通过二甲苯对对硝基苯甲酸进行脱水酯化、利用铁粉还原硝基、再加浓盐酸成盐的方法得到盐酸普鲁卡因。结果 改革后的实验条件有利于实验教学和学生实验。结论 此方法可用于实验教学。
关键词：盐酸普鲁卡因；实验合成；改革
doi ：10.3969/j.issn.1672-2779.2010.20.156 文章编号：1672-2779（2010）-20-0181-02
1 盐酸普鲁卡因实验课的开展
盐酸普鲁卡因实验是一门综合性实验。它利用了无机和有机化学的实验知识，有选择性地进行药物的分解、合成。使学生在实践中体会分析问题和解决问题的能力。实验过程中以学生为主体、教师为主导的实验教学模式[1]。实验内容由教师指定，实验采取二人一组的原则，学生在提示过后自行操作。在实验完成后师生一起进行分析和总结，以便提高学生在药物合成中的综合素质，激发学生的积极性和主动性，提高学生的动手能力和思维创新意识。 2 盐酸普鲁卡因的合成和改革步骤
2.1 盐酸普鲁卡因实验条件改革的必要 盐酸普鲁卡因的制备过程较为复杂，具有一定的难度，是一门综合性较强的实验。其制备时间较长，产率低，操作不当同时存在一定的安全隐患，因此要严格按照操作规程掌握好时间和温度，正确把握操作步骤。学生在实验过程中存在着一定的思想压力。而且在实验后期的成盐过程中成功率几乎为零，大大挫伤了学生的积极性。经过某些实验条件的优化和改革，实验成功率由原来的1%～3%转化为现在的90%～95%，因此该实验得以圆满完成，大大增加了学生对药物化学实验的成就感和积极性，实验教学质量同时也得到了提高。
2.2 盐酸普鲁卡因的制备路线
pH 至5.0，再以饱和硫化钠碱化pH8.0，然后冷却至10℃以下加饱和碳酸钠碱化pH10.0，抽滤得普鲁卡因晶体。
2.3.3 成盐过程 将普鲁卡因晶体在冰浴中加浓盐酸至pH5.5，加热至50℃，加精制氯化钠至饱和，加入适量保险粉，升温至60～70℃，过滤，冷却结晶，几乎很难得到盐酸普鲁卡因晶体。问题是：固体物加浓盐酸至Ph=5.5，几乎都是固体，无法检测pH 值，而后面继续添加氯化钠、保险粉亦是固体，很难得到液体溶液。但实验需要得到的是把固体杂质和盐酸普鲁卡因结晶分离? 按前面如此操作几乎无法分离盐酸普鲁卡因结晶。
改革方案二：怎么样分离盐酸普鲁卡因晶体？
将普鲁卡因晶体在冰浴中加浓盐酸至Ph=5.5以后，再加饱和碳酸钠调节至液态状，以保证后面添加氯化钠、保险粉后仍是液态状即可。如此操作后，产品成功率为90%～95%，实验得以圆满完成。实验结果如下：
表1 分离盐酸普鲁卡因结晶的溶剂效果比较表
溶剂 普鲁卡因量(g) pH值 盐酸普鲁卡因量(g) 颜色 产品收率(约)(%)纯化水 10 5.5 0.3 白色 3 无水乙醇 8 5.5 3.6 白色 43 正丁醇 9 5.5 1.5 白色 17 异丙醇 7 5.5 0.8 黄白色 11 无水乙醚 8 5.5 2.8 白色 35 丙酮 9 5.5 0.7 白色 8 饱和碳酸钠 10 5.5 5.1 白色 50
2.3 盐酸普鲁卡因实验操作过程和改革方案
2.3.1 酯化过程 所使用的试剂为二甲苯，利用二甲苯的回流将对硝基苯甲酸中的结合水带出。而在此过程中一定要把对硝基苯甲酸中的结合水完全带出才能使后面的反应完全。在整个回流过程中不能突然停止搅拌，并严格控制温度在145℃，连续反应时间6h 。反应液留待下一次实验用。
改革方案一：反应液中未反应完全的对硝基苯甲酸固体物多且冷后坚硬，给过滤带来很大困难？
现在我们把下一步的实验连贯在这次实验中一起做，趁未反应的对硝基苯甲酸固体物还没完全结块时加3%盐酸溶液进行过滤去除。好处有：①过滤操作简单容易。②不会损失反应物。③大量节省实验时间。④给后一工序创造良好的反应条件。 2.3.2 还原、中和过程 主要掌握铁粉要充分参与反应，并维持在40～45℃反应2h ；严格控制好pH 值：先用稀盐酸酸化
结论：通过200组学生的实验证明，以对硝基苯甲酸为原料，经过酯化、还原、成盐三步骤反应，优化酯化和成盐条件，产品收率大大提高，学生实验的积极性大大加强。 3 实验结论
3.1 通过酯化过程的条件改革 简化了实验步骤带来的困难，把分离未反应的对硝基苯甲酸实验过程合并于脱水酯化过程中，避免了滤渣冷后坚硬难以过滤的缺点，也大大缩短了实验时间。但酯化过程时间是否过长？有待下一步改革。
3.2 通过成盐过程的条件改革 普鲁卡因固体物在冰浴条件下加浓盐酸调pH=5.5后，几乎都是固体，而要得到含有盐酸普鲁卡因的液体非常困难。现在我们把pH 调成5.5后的面团状物加饱和碳酸钠调成液态状后进行后续操作就得心应手了。这给一直困扰学生实验的积极性带来非常有利的优点。
3.3 从实验结果可以看出 在普鲁卡因晶体加浓盐酸调pH=5.5成盐后，再酌情添加适量的饱和碳酸钠溶液，以便后续分离操作的进行。避免了“面团”现象的出现，产品收得率也大大得以提高：由以前实验成功率2%～3%变为现在实验成功率50%左右的局面。
182
4 实验结果
通过2008级、2009级药学专业近200组学生的实验证明：改革后的实验方案（酯化过程、成盐过程的改革）切实可行。目前盐酸普鲁卡因实验结果几乎为零的结局，仍然困扰着很多高校的学生实验，一直以来没有比较完善的合成方案来解决该问题，实验难以开展下去。通过该实验的两个改革点，使得我校的盐酸普鲁卡因实验得以圆满完成。
由2008级和2009级近200组学生的实验效果来看，学生实验时由原来的“恐惧心态”转变为“轻松自如心态”，实验失败率大大降低，积极性普遍增强。通过该实验的改革，再对比前几届学生的该实验现象，实验结果大为改善，学生实验能够顺利进行下去。学生普遍反映该实验条件有必要进行改革。
通过该实验条件的改革，促进了教师与学生的互动过程，
第8卷第20期·总第100期 2010年10月·下半月刊
培养了学生的探索思维能力和操作技能，也提高了教师的创新意识和综合素质。当然如何激发学生对科学实验的兴趣和热情？如何让学生掌握“学以致用”？这是摆在教师培养现代人才面前的迫切任务，其意义和责任重大。当然这也要求我们教师要不断改进教学方法和理念，不断探索和优化教学过程和内容，要不断转换教师角色：变知识传授者为知识引导者、促进者、合作者[2]。如何培养新世纪社会需要的基层专业人才，这是我们做教师需要改进、完善和探讨的问题。 参考文献
[1] 顾军, 韩香, 张秋燕, 等. 药物化学实验教学创新初探[J].华夏医学,2(17):
244-245.
[2] 尹红梅, 金辉, 成丽, 等. 高等药物化学实验课程的建设[J].药学教育,2009,
25(3):37-39. （本文校对：张文娟 收稿日期：2010-07-14）
藜芦提取物的体外DPPH 自由基清除作用和对PC9肺癌细胞增殖的影响
金善花1 姜成哲2 崔正云2* 尹希俊2 安仁波3
1 吉林省延边中医医院（133000） 2 吉林省延边大学农学院（133400）
3 吉林省延边大学药学院（133000）
摘要：目的 探讨藜芦(Veratrum nigrum)提取物对DPPH 自由基清除作用和对人体肺癌细胞系PC9细胞增殖的影响，比较藜芦的水提物与醇提物的作用差异。方法 DPPH自由基清除法和CCK-8细胞毒性检测法。结果 藜芦水提物和醇提物在10 mg/ml 时体外DPPH 清除率分别为 52.3% 和42.8%。在体外培养的条件下能明显抑制PC9细胞的增殖，并且呈浓度依赖性，而水提物只在高浓度时有抑制作用。结论 藜芦提取物具有DPPH 自由基清除作用，并且对PC9细胞的体外增殖有明显的抑制作用。
关键词：藜芦提取物；DPPH ；PC9细胞；细胞毒性
doi ：10.3969/j.issn.1672-2779.2010.20.157 文章编号：1672-2779（2010）-20-0182-02 Investigate the Effects of Two Kinds of Extracts from LiLu (Veratrum nigrum) on DPPH Radical Clearing and on the Proliferation of Human Lung Cancer PC9 Cells
Jin Shanhua1, Cui Zhengyun2* Jiang Chengzhe2 ,, Yin Xijun2, An Renbo3
(1. Yanbian Traditional Hospital. Jinlin Yanji, 133000；2.Agricultural College of Yanbian University, Jilin Longjing 133400；
3. Pharmaceutical College of Yanbian University, Jilin Longjing 133000)
Abstract ：Purpose To investigate the effects of two kinds of extracts from LiLu (Veratrum nigrum) on DPPH radical clearing and on the proliferation of human lung cancer PC9 cells. Methods PC9 cells were treated with various concentrations of methanol or water extract from LiLu respectively. Cell proliferation of each sample was measured 72 hours after treatment by CCK-8 kit. Results Those extracts significantly inhibited the proliferation of PC9 cells on dose-dependent manner. (DPPH) Conclusion Extracts of Lilu exert inhibitory effects on proliferation of PC9 lung cancer cells in vitro.
Key Words：Lilu Extract；PC9 cells；Cytotoxicity
藜芦，多年生草本，为百合科植物藜芦、牯岭藜芦、毛穗藜芦、兴安藜芦及毛叶藜芦的根及根茎。. 藜芦分布于东北、华北及陕西、甘肃、山东、河南等地。兴安藜芦的地下部分含有伪芥芬胺（pseudojervng) ，藜芦碱甙（veratrosine) ，藜芦甾二烯胺，芥芬胺，藜芦定（verdine) ，玉红芥芬胺，藜芦马林碱（veramarine) ，藜芦酰棋盘花胺，异玉红芥芬胺，藜芦嗪，藜芦胺。药性为苦，辛，寒，有毒。兴安藜芦根浸膏的水溶液及精制品的醇溶液，经过多种麻醉动物实验均证明具有明显而持久的降压作用，用于中风；还具有杀灭蚊蝇及其幼虫的能力，也可作农药杀虫剂[1]。
本文从调查体外细胞毒性着手，研究藜芦根浸泡液对肺癌细胞系PC9细胞增殖的影响。检测细胞存活和增殖的方法很多，其中MTT 比色法最为常见，但是利用MTT 方法因要检测的存活细胞线粒体脱氢酶反应中生成的结晶产物不溶于水，测定其浓度时容易产生不准，对实验结果造成一定的影响。近年来，新出现的 Cell Counting Kit-8 (简称CCK-8) 法能够克服
*通迅作者
MTT 法上述的不足[3]，它的检测原理和检测条件与MTT 法有所不同，可以直接对反应产物进行比色，大大减少实验误差。 1 材料与方法 1.1 材料
1.1.1 藜芦提取物的制备 用水和乙醇分别提取，用滤器过滤灭菌。
1.1.2 细胞株 人肺癌细胞系PC9细胞，韩国三星首尔医院馈赠。
1.1.3 主要仪器 超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，酶标仪(Sunnyvale CA，USA) ，离心机，高压灭菌器，96孔细胞培养板等。
1.1.4 主要试剂 RPMI11640培养基，10%胎牛血清，青霉素和链霉素各100U/ml，CCK-8 细胞毒性试剂盒（ Dojindo Molecular Technologies，Inc. ，Japan ）。 1.2 方法
1.2.1 分组及细胞增殖实验 藜芦提取物采用1/5系列稀释法分为 5%，1%，0.2%，0.04%，并设不加提取物的阴性对照组
第8卷第20期·总第100期 2010年10月·下半月刊
181
盐酸普鲁卡因实验合成条件的改革
刘 冰 蔡小华 湖南省怀化医学高等专科学校（418000）
摘要：目的 针对目前很多高校学生做盐酸普鲁卡因合成实验时，实验结果几乎为零的现象，本文针对实验过程中的部分条件进行了改革，
提高了产品的收得率和学生实验的积极性，同时教学效果也得到了提高。方法 通过二甲苯对对硝基苯甲酸进行脱水酯化、利用铁粉还原硝基、再加浓盐酸成盐的方法得到盐酸普鲁卡因。结果 改革后的实验条件有利于实验教学和学生实验。结论 此方法可用于实验教学。
关键词：盐酸普鲁卡因；实验合成；改革
doi ：10.3969/j.issn.1672-2779.2010.20.156 文章编号：1672-2779（2010）-20-0181-02
1 盐酸普鲁卡因实验课的开展
盐酸普鲁卡因实验是一门综合性实验。它利用了无机和有机化学的实验知识，有选择性地进行药物的分解、合成。使学生在实践中体会分析问题和解决问题的能力。实验过程中以学生为主体、教师为主导的实验教学模式[1]。实验内容由教师指定，实验采取二人一组的原则，学生在提示过后自行操作。在实验完成后师生一起进行分析和总结，以便提高学生在药物合成中的综合素质，激发学生的积极性和主动性，提高学生的动手能力和思维创新意识。 2 盐酸普鲁卡因的合成和改革步骤
2.1 盐酸普鲁卡因实验条件改革的必要 盐酸普鲁卡因的制备过程较为复杂，具有一定的难度，是一门综合性较强的实验。其制备时间较长，产率低，操作不当同时存在一定的安全隐患，因此要严格按照操作规程掌握好时间和温度，正确把握操作步骤。学生在实验过程中存在着一定的思想压力。而且在实验后期的成盐过程中成功率几乎为零，大大挫伤了学生的积极性。经过某些实验条件的优化和改革，实验成功率由原来的1%～3%转化为现在的90%～95%，因此该实验得以圆满完成，大大增加了学生对药物化学实验的成就感和积极性，实验教学质量同时也得到了提高。
2.2 盐酸普鲁卡因的制备路线
pH 至5.0，再以饱和硫化钠碱化pH8.0，然后冷却至10℃以下加饱和碳酸钠碱化pH10.0，抽滤得普鲁卡因晶体。
2.3.3 成盐过程 将普鲁卡因晶体在冰浴中加浓盐酸至pH5.5，加热至50℃，加精制氯化钠至饱和，加入适量保险粉，升温至60～70℃，过滤，冷却结晶，几乎很难得到盐酸普鲁卡因晶体。问题是：固体物加浓盐酸至Ph=5.5，几乎都是固体，无法检测pH 值，而后面继续添加氯化钠、保险粉亦是固体，很难得到液体溶液。但实验需要得到的是把固体杂质和盐酸普鲁卡因结晶分离? 按前面如此操作几乎无法分离盐酸普鲁卡因结晶。
改革方案二：怎么样分离盐酸普鲁卡因晶体？
将普鲁卡因晶体在冰浴中加浓盐酸至Ph=5.5以后，再加饱和碳酸钠调节至液态状，以保证后面添加氯化钠、保险粉后仍是液态状即可。如此操作后，产品成功率为90%～95%，实验得以圆满完成。实验结果如下：
表1 分离盐酸普鲁卡因结晶的溶剂效果比较表
溶剂 普鲁卡因量(g) pH值 盐酸普鲁卡因量(g) 颜色 产品收率(约)(%)纯化水 10 5.5 0.3 白色 3 无水乙醇 8 5.5 3.6 白色 43 正丁醇 9 5.5 1.5 白色 17 异丙醇 7 5.5 0.8 黄白色 11 无水乙醚 8 5.5 2.8 白色 35 丙酮 9 5.5 0.7 白色 8 饱和碳酸钠 10 5.5 5.1 白色 50
2.3 盐酸普鲁卡因实验操作过程和改革方案
2.3.1 酯化过程 所使用的试剂为二甲苯，利用二甲苯的回流将对硝基苯甲酸中的结合水带出。而在此过程中一定要把对硝基苯甲酸中的结合水完全带出才能使后面的反应完全。在整个回流过程中不能突然停止搅拌，并严格控制温度在145℃，连续反应时间6h 。反应液留待下一次实验用。
改革方案一：反应液中未反应完全的对硝基苯甲酸固体物多且冷后坚硬，给过滤带来很大困难？
现在我们把下一步的实验连贯在这次实验中一起做，趁未反应的对硝基苯甲酸固体物还没完全结块时加3%盐酸溶液进行过滤去除。好处有：①过滤操作简单容易。②不会损失反应物。③大量节省实验时间。④给后一工序创造良好的反应条件。 2.3.2 还原、中和过程 主要掌握铁粉要充分参与反应，并维持在40～45℃反应2h ；严格控制好pH 值：先用稀盐酸酸化
结论：通过200组学生的实验证明，以对硝基苯甲酸为原料，经过酯化、还原、成盐三步骤反应，优化酯化和成盐条件，产品收率大大提高，学生实验的积极性大大加强。 3 实验结论
3.1 通过酯化过程的条件改革 简化了实验步骤带来的困难，把分离未反应的对硝基苯甲酸实验过程合并于脱水酯化过程中，避免了滤渣冷后坚硬难以过滤的缺点，也大大缩短了实验时间。但酯化过程时间是否过长？有待下一步改革。
3.2 通过成盐过程的条件改革 普鲁卡因固体物在冰浴条件下加浓盐酸调pH=5.5后，几乎都是固体，而要得到含有盐酸普鲁卡因的液体非常困难。现在我们把pH 调成5.5后的面团状物加饱和碳酸钠调成液态状后进行后续操作就得心应手了。这给一直困扰学生实验的积极性带来非常有利的优点。
3.3 从实验结果可以看出 在普鲁卡因晶体加浓盐酸调pH=5.5成盐后，再酌情添加适量的饱和碳酸钠溶液，以便后续分离操作的进行。避免了“面团”现象的出现，产品收得率也大大得以提高：由以前实验成功率2%～3%变为现在实验成功率50%左右的局面。
182
4 实验结果
通过2008级、2009级药学专业近200组学生的实验证明：改革后的实验方案（酯化过程、成盐过程的改革）切实可行。目前盐酸普鲁卡因实验结果几乎为零的结局，仍然困扰着很多高校的学生实验，一直以来没有比较完善的合成方案来解决该问题，实验难以开展下去。通过该实验的两个改革点，使得我校的盐酸普鲁卡因实验得以圆满完成。
由2008级和2009级近200组学生的实验效果来看，学生实验时由原来的“恐惧心态”转变为“轻松自如心态”，实验失败率大大降低，积极性普遍增强。通过该实验的改革，再对比前几届学生的该实验现象，实验结果大为改善，学生实验能够顺利进行下去。学生普遍反映该实验条件有必要进行改革。
通过该实验条件的改革，促进了教师与学生的互动过程，
第8卷第20期·总第100期 2010年10月·下半月刊
培养了学生的探索思维能力和操作技能，也提高了教师的创新意识和综合素质。当然如何激发学生对科学实验的兴趣和热情？如何让学生掌握“学以致用”？这是摆在教师培养现代人才面前的迫切任务，其意义和责任重大。当然这也要求我们教师要不断改进教学方法和理念，不断探索和优化教学过程和内容，要不断转换教师角色：变知识传授者为知识引导者、促进者、合作者[2]。如何培养新世纪社会需要的基层专业人才，这是我们做教师需要改进、完善和探讨的问题。 参考文献
[1] 顾军, 韩香, 张秋燕, 等. 药物化学实验教学创新初探[J].华夏医学,2(17):
244-245.
[2] 尹红梅, 金辉, 成丽, 等. 高等药物化学实验课程的建设[J].药学教育,2009,
25(3):37-39. （本文校对：张文娟 收稿日期：2010-07-14）
藜芦提取物的体外DPPH 自由基清除作用和对PC9肺癌细胞增殖的影响
金善花1 姜成哲2 崔正云2* 尹希俊2 安仁波3
1 吉林省延边中医医院（133000） 2 吉林省延边大学农学院（133400）
3 吉林省延边大学药学院（133000）
摘要：目的 探讨藜芦(Veratrum nigrum)提取物对DPPH 自由基清除作用和对人体肺癌细胞系PC9细胞增殖的影响，比较藜芦的水提物与醇提物的作用差异。方法 DPPH自由基清除法和CCK-8细胞毒性检测法。结果 藜芦水提物和醇提物在10 mg/ml 时体外DPPH 清除率分别为 52.3% 和42.8%。在体外培养的条件下能明显抑制PC9细胞的增殖，并且呈浓度依赖性，而水提物只在高浓度时有抑制作用。结论 藜芦提取物具有DPPH 自由基清除作用，并且对PC9细胞的体外增殖有明显的抑制作用。
关键词：藜芦提取物；DPPH ；PC9细胞；细胞毒性
doi ：10.3969/j.issn.1672-2779.2010.20.157 文章编号：1672-2779（2010）-20-0182-02 Investigate the Effects of Two Kinds of Extracts from LiLu (Veratrum nigrum) on DPPH Radical Clearing and on the Proliferation of Human Lung Cancer PC9 Cells
Jin Shanhua1, Cui Zhengyun2* Jiang Chengzhe2 ,, Yin Xijun2, An Renbo3
(1. Yanbian Traditional Hospital. Jinlin Yanji, 133000；2.Agricultural College of Yanbian University, Jilin Longjing 133400；
3. Pharmaceutical College of Yanbian University, Jilin Longjing 133000)
Abstract ：Purpose To investigate the effects of two kinds of extracts from LiLu (Veratrum nigrum) on DPPH radical clearing and on the proliferation of human lung cancer PC9 cells. Methods PC9 cells were treated with various concentrations of methanol or water extract from LiLu respectively. Cell proliferation of each sample was measured 72 hours after treatment by CCK-8 kit. Results Those extracts significantly inhibited the proliferation of PC9 cells on dose-dependent manner. (DPPH) Conclusion Extracts of Lilu exert inhibitory effects on proliferation of PC9 lung cancer cells in vitro.
Key Words：Lilu Extract；PC9 cells；Cytotoxicity
藜芦，多年生草本，为百合科植物藜芦、牯岭藜芦、毛穗藜芦、兴安藜芦及毛叶藜芦的根及根茎。. 藜芦分布于东北、华北及陕西、甘肃、山东、河南等地。兴安藜芦的地下部分含有伪芥芬胺（pseudojervng) ，藜芦碱甙（veratrosine) ，藜芦甾二烯胺，芥芬胺，藜芦定（verdine) ，玉红芥芬胺，藜芦马林碱（veramarine) ，藜芦酰棋盘花胺，异玉红芥芬胺，藜芦嗪，藜芦胺。药性为苦，辛，寒，有毒。兴安藜芦根浸膏的水溶液及精制品的醇溶液，经过多种麻醉动物实验均证明具有明显而持久的降压作用，用于中风；还具有杀灭蚊蝇及其幼虫的能力，也可作农药杀虫剂[1]。
本文从调查体外细胞毒性着手，研究藜芦根浸泡液对肺癌细胞系PC9细胞增殖的影响。检测细胞存活和增殖的方法很多，其中MTT 比色法最为常见，但是利用MTT 方法因要检测的存活细胞线粒体脱氢酶反应中生成的结晶产物不溶于水，测定其浓度时容易产生不准，对实验结果造成一定的影响。近年来，新出现的 Cell Counting Kit-8 (简称CCK-8) 法能够克服
*通迅作者
MTT 法上述的不足[3]，它的检测原理和检测条件与MTT 法有所不同，可以直接对反应产物进行比色，大大减少实验误差。 1 材料与方法 1.1 材料
1.1.1 藜芦提取物的制备 用水和乙醇分别提取，用滤器过滤灭菌。
1.1.2 细胞株 人肺癌细胞系PC9细胞，韩国三星首尔医院馈赠。
1.1.3 主要仪器 超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，酶标仪(Sunnyvale CA，USA) ，离心机，高压灭菌器，96孔细胞培养板等。
1.1.4 主要试剂 RPMI11640培养基，10%胎牛血清，青霉素和链霉素各100U/ml，CCK-8 细胞毒性试剂盒（ Dojindo Molecular Technologies，Inc. ，Japan ）。 1.2 方法
1.2.1 分组及细胞增殖实验 藜芦提取物采用1/5系列稀释法分为 5%，1%，0.2%，0.04%，并设不加提取物的阴性对照组