牛多杀性巴氏杆菌病病原的分离与鉴定

　　JTCVM

2005年第3期

实验技术

耐药性和错过治疗时机[3,4]。社,1992,25～261

参考文献:

[3]李　峰.波尔山羊羔羊大肠杆菌病的诊治[J].中国兽医

[1]蔡宝祥.家畜传染病学(第四版)[M]1北京:中国农业

科技,2000,30(4):37～381

出版社,2001,46～49.

[4]李梦元.规模化养猪场大肠杆菌的耐药性监测及血清流

[2]曹澍泽.兽医微生物与免疫学技术[M].北京:农业出版

行病学调查[J].中国兽医学报,2004,24(1):16～181

牛多杀性巴氏杆菌病病原的分离与鉴定

张红见1

,韩志辉1

,李成业1

,童成岚1

,芦宝林

2

(11青海大学农牧学院,青海西宁　810003;21湟源县农牧局)

　　中图分类号:S855.12　　

　　　　　文献标识码:A　　文章编号:1000-6354(2005)03-0035-02

　　牛多杀性巴氏杆菌病,又称“牛出败”,全称“牛出血性啉)、CMP(氯霉素)、CRO(头孢三嗪)、CTD(头孢他啶)、CTX

败血病”,是由多杀性巴氏杆菌引起的一种以高热和败血症(头孢噻肟)、ERY(红霉素)、GEN(庆大霉素)、KAN(卡那霉

为特征的急性传染病

[1]

。2003年10月初,湟源县某牛场的素)、NI(呋喃妥因)、NOR(氟哌酸)、OXA(苯唑青霉素)、STR

牦牛、犏牛等突然发病、死亡,前后共发病7头,发病率为

(链霉素)、PIP(氧哌嗪青霉素)、RIF(利福平)、SXT(复合磺

0187%(7/801);死亡7头,致死率为100%(7/7)。其临床胺)、TET(四环素)、TOB(妥布霉素)、VAN(万古霉素)等23症状:病初体温高达41～42℃,精神沉郁,

口吐白

,饮食欲

种,批号:20020606。

减退或废绝,呼吸加快,有痛苦性干咳,流涎,肌肉震颤,腹1.2　方法

痛,下痢,粪便初为粥状,后为液状,间或杂有黏液、黏膜碎片1.2.1　病原菌检查　病料进行触片,分别进行革兰氏染色、

及血液,气味恶臭;随着病情的发展在颈部、咽喉部及胸前的美兰染色、镜检。

皮下结缔组织出现弥漫性炎性水肿,可视黏膜发绀;肺部听1.2.2诊有支气管音及水泡音　细菌分离培养　将病料分别无菌接种到5%犊牛血

,有的听到胸腹摩擦音。病理变化:清营养肉汤、血清琼脂平板、普通琼脂平板、鲜血琼脂平板,

脾有小点出血;肝肿胀,质脆,个别牛肝表面有坏死灶;肾稍肿;淋巴结明显水肿;肺脏表面有肝变区,呈大理石样花纹,37℃培养18～24h,并进行细菌的纯化培养。

有纤维素性胸膜炎变化;心冠脂肪、心内外膜出血明显,心包1.2.3　生化试验　钩取纯培养物无菌接种于上述各种生化

积水;咽喉、颈、四肢等部皮下有浆液性浸润,切开流出深黄试验培养基中,37℃培养24～48h。

色透明的液体,间或杂有血液,咽周围组织和会咽软骨韧带1.2.4　动物试验　将纯培养物制成菌悬液给2只小白鼠腹

呈黄色胶样浸润,上呼吸道黏膜卡他性潮红。笔者于2003腔注射,0.2ml/只。

年10月初对其进行实验室检查,确诊为牛多杀性巴氏杆菌1.2.5　药敏试验　将纯化好的细菌用灭菌生理盐水洗下,

病,并采取了相应的预防措施,再无新病例发生,现将结果报并且与麦氏比浊管比浊,选取112×109个活菌/ml浓度的

告如下。

菌悬液,用灭菌棉拭子均匀涂布鲜血清琼脂平板,经室温干1　材料与方法燥3～5min后,分别贴上各种药敏纸片,每块平板贴3片,

1.1　材料

37℃培养18～24h判定结果,判定标准参照美国实验室标

1.1.1　病料　无菌采取牛心、肝、脾、肺、肾等脏器7份,置准委员会(NCCLS)药敏纸片扩散法法规。

4℃冰箱,待检。

2　结果1.1.2　培养基　5%犊牛血清营养肉汤、血清琼脂平板、普

2.1　病原菌检查

通琼脂平板、鲜血琼脂平板、各种生化试验培养基均由动物取肝、脾、肾等病料触片,革兰氏染色镜检,观察到革兰氏医学系传染病实验室自制。

阴性小杆菌;美兰染色镜检,观察到大量两极浓染的小杆菌。

1.1.3　实验动物　健康昆明系小白鼠2只(16～18g),均

2.2　菌落形态与培养特性

购于青海兽医生物制药厂。

血清肉汤培养24h后轻度浑浊,连续培养4～6d,有菌1.1.4　药敏试验　购自上海伊华医学科技有限公司,抗菌

膜产生,液体清彻,管底有粘稠液体;在普通琼脂平板上生长素种类为AKN(丁胺卡那)、AMP(氨苄青霉素)、CAR(羧苄

贫瘠;在鲜血琼脂培养基上形成灰白色、圆形、微隆起、半透青霉素)、CFP(头孢哌酮)、CFX(头孢呋新)、CFZ(头孢唑

明、湿润、表面光滑、边缘整齐的露珠样菌落,不溶血。

2.3　生化试验

收稿日期:2004-09-14

结果见表1。

作者简介:张红见(1970-),男,讲师,主要从事动物传染病教学与

2.4　动物试验

研究。

ζν　

2005年第3期

实验技术

表1　巴氏杆菌生化试验结果

三糖铁葡萄糖

+

　JTCVM

乳　糖

-

麦芽糖

-

甘露醇

+

蔗　糖

+

靛基质

+

甲基红

-。+;-

V-P-

H2S-

尿　素

-

枸橼酸

+

硝酸盐

-

运动力

　　注:“+”产酸,“-”阴性,“ ”产酸产气,三糖铁反应模式=

　　2只小白鼠于24～36h内死亡,剖检采取脏器进行细菌分离,获得与原分离菌株一致的小杆菌。

2.5　药敏试验

及时隔离病畜,迅速分离病原并做药敏试验,筛选高敏药物进行治疗,对尚未发病的牛只紧急接种牛出败疫苗,以便减少本病的发生。

3.4　药敏试验结果表明,巴氏杆菌对CRO、RIF、CFP、GEN、NI、PIP、CTD、CMP、NOR、AMP、ERY、AKN、TET、VAN、STR、CFZ、SXT高敏,对CTX、CAR、CFX中敏,对KAN、OXA、TOB

抑菌圈的测量结果见表2。

表2　巴氏杆菌抑菌圈的测量结果/cm

抗生素

CROVANRIFCFPPIPCTDCMPKAN

抑菌圈直　径

5.1202.7512.5293.3884.6472.5673.4521.339

抗生素

OXANORAMPERYGENAKNTETSTR

抑菌圈直　径

-2.8991.9573.0953.4573.2203.7752.249

抗生素

NICFXCARCTXCFZTOBSXT-

抑菌圈直　径

2.8801.9882.1792.1462.2000.9292.766-

耐药[5]。通过药敏试验筛选经济、疗效好的高敏药物进行治疗,既可取得良好的治疗效果,又可为以后该病的治疗提供参考依据。参考文献:

[1]CHOTIAN,S.

Isolation,identificationandserotypingof

pasteurellamultocidaisolationfrompneumobiclungsofBo2vineandtheirsensitivetoseveralantibioties.JurnalImuTernakdanveterier,1997,2(3):198～203.

[2]万马单智.防治牛出败病的体会[J].青海畜牧兽医杂

　　注:“-”无抑菌圈。志,2003,33(2):47.

[3]连玉意.牛巴氏杆菌病的诊治[J].中国兽医科技,2001,

31(3):35～36.

[4]汪力宽.水牛巴氏杆菌病的防治[J].中国兽医杂志,

2000,26(5):35.

[5]DVM,MS,Rossmanith,S.E.R.,MS,Wilt,G.R.andDVM,

MS,Wu,G.,Characterizationandcomparisonofantimicro2bialsusceptibilitiesandoutermembraneproteinandplas2midDNAprofilesofPasteurellahemolyticandcertainothermembersofthegenusPasteurella[J].AmericanJournalofVeterinaryResearch,1991,52(12):2016～2022.

3　小结与讨论

3.1　根据流行病学、临床症状、病理变化和实验室诊断,确

诊为牛多杀性巴氏杆菌。

3.2　由于巴氏杆菌为条件性致病菌,且该病多因冬春两季

气温骤变、潮湿、营养缺乏等诱因导致机体抵抗力下降,病原菌侵入机体,经淋巴循环,而发生内源性感染[2]。此次发病可能与当时气候骤变、降雪降温和饲料较为缺乏有关。这与连玉意[3]的“牛巴氏杆菌病的诊治”和汪力宽[4]的“水牛巴氏杆菌病的防治”中报道的基本一致。

3.3　平时要加强饲养管理,避免牲畜受寒、拥挤,保持牛场

清洁卫生,定期杀虫灭鼠,作好平时的预防消毒工作,发病时

复方磺胺间甲氧嘧啶缓释型注射液的毒性研究

张桂枝,罗永煌,李　竞,周廷宣

(西南农业大学动物科技学院,重庆　402460)

　　中图分类号:S859.7　　　　　　　　文献标识码:A　　文章编号:1000-6354(2005)03-0036-02　　复方磺胺间甲氧嘧啶缓释型注射液,由磺胺间甲氧嘧啶

(SMM)与甲氧苄啶(TMP)通过环糊精包合而成,具有缓释

{ν　

长效、复方增效等作用。为评价该制剂的安全性,笔者进行

收稿日期:2004-10-15

项目来源:重庆市科委科技攻关项目(7856)

作者简介:张桂枝(1972-),女,在读硕士,主要从事兽医药理学与毒

理学研究。罗永煌为通讯作者。

了急性毒性、蓄积毒性和耐受性研究,旨在为临床应用提供科学依据。

1　材料与试剂1.1　试验动物

　　JTCVM

2005年第3期

实验技术

耐药性和错过治疗时机[3,4]。社,1992,25～261

参考文献:

[3]李　峰.波尔山羊羔羊大肠杆菌病的诊治[J].中国兽医

[1]蔡宝祥.家畜传染病学(第四版)[M]1北京:中国农业

科技,2000,30(4):37～381

出版社,2001,46～49.

[4]李梦元.规模化养猪场大肠杆菌的耐药性监测及血清流

[2]曹澍泽.兽医微生物与免疫学技术[M].北京:农业出版

行病学调查[J].中国兽医学报,2004,24(1):16～181

牛多杀性巴氏杆菌病病原的分离与鉴定

张红见1

,韩志辉1

,李成业1

,童成岚1

,芦宝林

2

(11青海大学农牧学院,青海西宁　810003;21湟源县农牧局)

　　中图分类号:S855.12　　

　　　　　文献标识码:A　　文章编号:1000-6354(2005)03-0035-02

　　牛多杀性巴氏杆菌病,又称“牛出败”,全称“牛出血性啉)、CMP(氯霉素)、CRO(头孢三嗪)、CTD(头孢他啶)、CTX

败血病”,是由多杀性巴氏杆菌引起的一种以高热和败血症(头孢噻肟)、ERY(红霉素)、GEN(庆大霉素)、KAN(卡那霉

为特征的急性传染病

[1]

。2003年10月初,湟源县某牛场的素)、NI(呋喃妥因)、NOR(氟哌酸)、OXA(苯唑青霉素)、STR

牦牛、犏牛等突然发病、死亡,前后共发病7头,发病率为

(链霉素)、PIP(氧哌嗪青霉素)、RIF(利福平)、SXT(复合磺

0187%(7/801);死亡7头,致死率为100%(7/7)。其临床胺)、TET(四环素)、TOB(妥布霉素)、VAN(万古霉素)等23症状:病初体温高达41～42℃,精神沉郁,

口吐白

,饮食欲

种,批号:20020606。

减退或废绝,呼吸加快,有痛苦性干咳,流涎,肌肉震颤,腹1.2　方法

痛,下痢,粪便初为粥状,后为液状,间或杂有黏液、黏膜碎片1.2.1　病原菌检查　病料进行触片,分别进行革兰氏染色、

及血液,气味恶臭;随着病情的发展在颈部、咽喉部及胸前的美兰染色、镜检。

皮下结缔组织出现弥漫性炎性水肿,可视黏膜发绀;肺部听1.2.2诊有支气管音及水泡音　细菌分离培养　将病料分别无菌接种到5%犊牛血

,有的听到胸腹摩擦音。病理变化:清营养肉汤、血清琼脂平板、普通琼脂平板、鲜血琼脂平板,

脾有小点出血;肝肿胀,质脆,个别牛肝表面有坏死灶;肾稍肿;淋巴结明显水肿;肺脏表面有肝变区,呈大理石样花纹,37℃培养18～24h,并进行细菌的纯化培养。

有纤维素性胸膜炎变化;心冠脂肪、心内外膜出血明显,心包1.2.3　生化试验　钩取纯培养物无菌接种于上述各种生化

积水;咽喉、颈、四肢等部皮下有浆液性浸润,切开流出深黄试验培养基中,37℃培养24～48h。

色透明的液体,间或杂有血液,咽周围组织和会咽软骨韧带1.2.4　动物试验　将纯培养物制成菌悬液给2只小白鼠腹

呈黄色胶样浸润,上呼吸道黏膜卡他性潮红。笔者于2003腔注射,0.2ml/只。

年10月初对其进行实验室检查,确诊为牛多杀性巴氏杆菌1.2.5　药敏试验　将纯化好的细菌用灭菌生理盐水洗下,

病,并采取了相应的预防措施,再无新病例发生,现将结果报并且与麦氏比浊管比浊,选取112×109个活菌/ml浓度的

告如下。

菌悬液,用灭菌棉拭子均匀涂布鲜血清琼脂平板,经室温干1　材料与方法燥3～5min后,分别贴上各种药敏纸片,每块平板贴3片,

1.1　材料

37℃培养18～24h判定结果,判定标准参照美国实验室标

1.1.1　病料　无菌采取牛心、肝、脾、肺、肾等脏器7份,置准委员会(NCCLS)药敏纸片扩散法法规。

4℃冰箱,待检。

2　结果1.1.2　培养基　5%犊牛血清营养肉汤、血清琼脂平板、普

2.1　病原菌检查

通琼脂平板、鲜血琼脂平板、各种生化试验培养基均由动物取肝、脾、肾等病料触片,革兰氏染色镜检,观察到革兰氏医学系传染病实验室自制。

阴性小杆菌;美兰染色镜检,观察到大量两极浓染的小杆菌。

1.1.3　实验动物　健康昆明系小白鼠2只(16～18g),均

2.2　菌落形态与培养特性

购于青海兽医生物制药厂。

血清肉汤培养24h后轻度浑浊,连续培养4～6d,有菌1.1.4　药敏试验　购自上海伊华医学科技有限公司,抗菌

膜产生,液体清彻,管底有粘稠液体;在普通琼脂平板上生长素种类为AKN(丁胺卡那)、AMP(氨苄青霉素)、CAR(羧苄

贫瘠;在鲜血琼脂培养基上形成灰白色、圆形、微隆起、半透青霉素)、CFP(头孢哌酮)、CFX(头孢呋新)、CFZ(头孢唑

明、湿润、表面光滑、边缘整齐的露珠样菌落,不溶血。

2.3　生化试验

收稿日期:2004-09-14

结果见表1。

作者简介:张红见(1970-),男,讲师,主要从事动物传染病教学与

2.4　动物试验

研究。

ζν　

2005年第3期

实验技术

表1　巴氏杆菌生化试验结果

三糖铁葡萄糖

+

　JTCVM

乳　糖

-

麦芽糖

-

甘露醇

+

蔗　糖

+

靛基质

+

甲基红

-。+;-

V-P-

H2S-

尿　素

-

枸橼酸

+

硝酸盐

-

运动力

　　注:“+”产酸,“-”阴性,“ ”产酸产气,三糖铁反应模式=

　　2只小白鼠于24～36h内死亡,剖检采取脏器进行细菌分离,获得与原分离菌株一致的小杆菌。

2.5　药敏试验

及时隔离病畜,迅速分离病原并做药敏试验,筛选高敏药物进行治疗,对尚未发病的牛只紧急接种牛出败疫苗,以便减少本病的发生。

3.4　药敏试验结果表明,巴氏杆菌对CRO、RIF、CFP、GEN、NI、PIP、CTD、CMP、NOR、AMP、ERY、AKN、TET、VAN、STR、CFZ、SXT高敏,对CTX、CAR、CFX中敏,对KAN、OXA、TOB

抑菌圈的测量结果见表2。

表2　巴氏杆菌抑菌圈的测量结果/cm

抗生素

CROVANRIFCFPPIPCTDCMPKAN

抑菌圈直　径

5.1202.7512.5293.3884.6472.5673.4521.339

抗生素

OXANORAMPERYGENAKNTETSTR

抑菌圈直　径

-2.8991.9573.0953.4573.2203.7752.249

抗生素

NICFXCARCTXCFZTOBSXT-

抑菌圈直　径

2.8801.9882.1792.1462.2000.9292.766-

耐药[5]。通过药敏试验筛选经济、疗效好的高敏药物进行治疗,既可取得良好的治疗效果,又可为以后该病的治疗提供参考依据。参考文献:

[1]CHOTIAN,S.

Isolation,identificationandserotypingof

pasteurellamultocidaisolationfrompneumobiclungsofBo2vineandtheirsensitivetoseveralantibioties.JurnalImuTernakdanveterier,1997,2(3):198～203.

[2]万马单智.防治牛出败病的体会[J].青海畜牧兽医杂

　　注:“-”无抑菌圈。志,2003,33(2):47.

[3]连玉意.牛巴氏杆菌病的诊治[J].中国兽医科技,2001,

31(3):35～36.

[4]汪力宽.水牛巴氏杆菌病的防治[J].中国兽医杂志,

2000,26(5):35.

[5]DVM,MS,Rossmanith,S.E.R.,MS,Wilt,G.R.andDVM,

MS,Wu,G.,Characterizationandcomparisonofantimicro2bialsusceptibilitiesandoutermembraneproteinandplas2midDNAprofilesofPasteurellahemolyticandcertainothermembersofthegenusPasteurella[J].AmericanJournalofVeterinaryResearch,1991,52(12):2016～2022.

3　小结与讨论

3.1　根据流行病学、临床症状、病理变化和实验室诊断,确

诊为牛多杀性巴氏杆菌。

3.2　由于巴氏杆菌为条件性致病菌,且该病多因冬春两季

气温骤变、潮湿、营养缺乏等诱因导致机体抵抗力下降,病原菌侵入机体,经淋巴循环,而发生内源性感染[2]。此次发病可能与当时气候骤变、降雪降温和饲料较为缺乏有关。这与连玉意[3]的“牛巴氏杆菌病的诊治”和汪力宽[4]的“水牛巴氏杆菌病的防治”中报道的基本一致。

3.3　平时要加强饲养管理,避免牲畜受寒、拥挤,保持牛场

清洁卫生,定期杀虫灭鼠,作好平时的预防消毒工作,发病时

复方磺胺间甲氧嘧啶缓释型注射液的毒性研究

张桂枝,罗永煌,李　竞,周廷宣

(西南农业大学动物科技学院,重庆　402460)

　　中图分类号:S859.7　　　　　　　　文献标识码:A　　文章编号:1000-6354(2005)03-0036-02　　复方磺胺间甲氧嘧啶缓释型注射液,由磺胺间甲氧嘧啶

(SMM)与甲氧苄啶(TMP)通过环糊精包合而成,具有缓释

{ν　

长效、复方增效等作用。为评价该制剂的安全性,笔者进行

收稿日期:2004-10-15

项目来源:重庆市科委科技攻关项目(7856)

作者简介:张桂枝(1972-),女,在读硕士,主要从事兽医药理学与毒

理学研究。罗永煌为通讯作者。

了急性毒性、蓄积毒性和耐受性研究,旨在为临床应用提供科学依据。

1　材料与试剂1.1　试验动物