４ｌ卷３期
２０（）１年６月微Ａｄ４Ｍ跏艟ｏｋ鲁证ｎｓｉｎｋｎ生物学报Ｖｎｌ．４Ｎｏ３２００ｌ』叩ｅ
细胞通透性的改变及其应用”
罗杰
（华中科技大学牛向科学与技术学院武汉４姗４）
ＣＥＬＬＰＥＲＭＥＡＢＩＬｌＺＥＤＡＮＤＩＴ’ＳＡＰＰＬＩＣＡＴＩｏＮ“
ＬｕｏＪｉｏ
＆如拼Ｆ，咖ｓ…ＤｎｄＴｋｂｎ０｛０∥，Ｈｎ船＾。喇ｏ㈣ｌｈ盯＆…ｅｍ以啊“∞如盯，胁ｈＲ４３００７４，如眦
关键词：细咆通透ｌ生，酶话测定，酶，蛋白质提取．产物分泌，生物转化
中田分类号：０９３９９７文献标识码：Ｂ文章编号：０００Ｉ一６２０９ｆ２００¨０３一０３８６－０４
本文综述丁细胞通透性的改变厦在胞内酶测定、胞内酶，蛋白质提取、细胞代蹴产物分泌及生物转化等方面的应用。
１细胞通透性的改变
为ｒ克服由于细胞壁、细胞膜存在而形成的渗透壁障，人们通过物理、化学等方法改变细胞壁、膜的通透性。通过以上处理，渗漏细胞通静仍保持其形态上的完整眭．但由于其细胞壁、膜受到了一定的破坏，其对低分子量物质的渗透障碍被部分或完全解陈。
细胞通透性改娈因不同的微生物类型而有所不同，即使对于同类捌的微生物，也会由于细胞壁、膜的组成和结构不同而有很大差别。另外近胡对地ｎ口ｗ缸ｚ驴ｏｆ”池和跖ｒ。如印。ｒⅡ如阽Ⅲｅ吐ｉ德尔布有孢酵母的研究表明，细胞通透性的改变随菌龄不同，蹙化不大…。改变细胞通透性的方法很多，如超声、冻融、有机溶剂（甲苯、＿二甲亚砜等）、击污剂（如ｃＴＡＢ、Ｒ种ｎ一８０晡ｌｏｌｌｘ．１００等）和螫台剂（如ＥＤＴＡ）处理等。
２应用
２．１用于胞内酶活力的测定
对于胞内酶的测定，以往常采用机械法进行细胞破碎后测定提取液中的酶活力，不但繁琐费时，结果也不甚准确。Ｌａｏｕ８ｒ等研究了包括Ｐｌｕｒｏｎ记Ｆ－６８在内的各种表面活性剂对测定完整ｓ∞螂西“ｗ绁胞中醇脱氢酶活力的影响。Ｇｏｗｄａ等”‘用毛地黄苷处理尉叫晰，。删加ｇ“如，分别测定其胞内醇脱氢酶
ｘ．１００结合毛地黄苷处理如蒯讯６。ｉ西谢，并在此基础（＾ＤＨ）、Ｂ一葡萄糖苷酶、己糖激酶等酶括力．结果明显高于用匀浆、超声、甲苯自溶及用磷酸钾缓冲液提取等方法。Ｂｌａｎｋｅｎｓ忙ｉ１１等”１用非离子型去污利Ｔ＾“Ｊｎ
上发展ｒ一套流动注射法半连续测定甲醛脱氧酶（ＦＤＨ）活力。ＡＪａｍｄｅｅ等用ｃＴＡＢ、毛地黄苷处理嘈甲基酵母刊如缸ｐｍ珊，细胞干重盈蛋白质分疑均下降，但所测酶活力高于细胞破碎后所删的结果。另外，用有机溶剂处理后的渗漏细胞也被用来毂ｆ定胞内半乳耱苷酶和细胞色素ｃ氧化酶活力。
２．２用于胞内酶，蛋白质的提取
绝大多数的重组蛋白质／酶位于胞内，目前工业上多采用机械法（高压匀浆和球磨法等）将细胞破碎。国家九五科技攻关重点资助项目（９６．ｃ０２．０３＿０
作者简介：罗杰（Ｊ９７Ｉ一），男，２９岁．讲师。收稿日期：２０００．０４一１８．修回日期：２００ｍｌｏ—０８万方数据
３期罗杰：细胞通透性的改变及其应用３８７后提取，存在着如Ｆ缺点：破碎后细胞碎片过多；胞内棱酸物质的释放使提取液牯度大大增加；几乎释散ｒ所有胞内可溶性蛋白质．使杂蛋白质含量过大。近年来．化学通遘法提取胞内蛋白质，酶出其陕速、简便、选择胜强等特点逐渐受到人们的重视，
ＭａｗｌＩｊ等对运用ＥＤＴＡ和热冲击处理￡．∞血提取用质酶（ｐｅｎｐｌａｓｌｎ记ｅｎｚｙｍＰｓ）进行了研究，ｃｈａｍ等用渗逢压冲击结台氯仿／胍处艘扶重组Ｅ蒯ｆ中提取人胱氡酸蛋白酶抑制荆ｃｖａ删ｎ．ｃ。Ｎｏｖｅｌ】ａ“则系统地比较ｆ化学渗橱法，冻融法、超声往对Ｅｃｏ“青霉素酰化酶的提取效率的影响，超声法提取总蛋白含量最高，但纯化系数极低。溶菌酶加ＥＤＴＡ处理后酶活力最高，但纯化系数仍不高。室温ｒ以胍加ＦＤ．ＴＡ处理后酶活力保留８０％，杂蛋白含量侵低．纯化系数钺高。
Ｌｕｌｚｅ√“将化学通透与高压匀浆相结合，提取胞内蛋白质取得了较好的效果。最近Ｆ甜ｃｏｎｅｒ等用ＥＤ．ＴＡ（Ｏ．３ｍｍ枷Ｌ）和脲（６ｍｕｌ，Ｌ）处理Ｅ．ｆｏ雎细胞，３０ｍｊｎ内几１乎１００％的＿ｕｊ溶性蛋白释放到胞外。目前对于古有重组蛋白的Ｆ．ｏ诫细胞的化学通透研究正在进行中。ＮａＲＩ“等“在实际发酵条件下对Ｆ…“生＆和胞内蛋白释放的研究表明：Ｏ４ｍ０１，Ｉ胍与０５％Ｔｄｔｏｎｘ－１００连用，１ｈ内可释放７５％的胞内蛋白．除去溶剂后细胞生长仍口ｒ得到恢复。ＧｅｈＩＩＩｌｉｃｌｌ等”’将重组Ｅ
理．经微滤得到链激酶。酶收率８２％．纯度４６％。
ｖ；ｎａ等”曲￡ｒ。ｉｉ和Ｂｃｏ矗细胞琼干后用胍，盐酸、ｎｌ。ｎｘ，ｌｏｏ处ｓｕ＆ｆ“＂中导人来自ｍｍ＾∥矗ｎ蚰卅＾㈣ｈ￡ｉｃｎ的具有融菌作用的葡聚糖酶基因。Ｐａｒｋ等”利用基因丁程技术破坏ｓ㈣函ｚ舯中与细胞壁形成有关的ＫＮＲ４基因，重组细胞的通透性明显提高，可用于进行外源篮［Ｊ质的生产。Ｆ１ｅｅｒ等将带自破坏掉ＰＤＲｌ、ＥＧＲ４基因的质粒导人ｓｃ竹删“ｍｅ中替换原来的正常基因，重组细胞用于牛物活性物质的筛选、生物催化和代谢途径研究。
２．３增加代谢产物的分泌
Ｔａｋｅ出霄ｅ等”’将静止期的ｓ柙州ｂｔ啪用甲苯、已醇和ｒｒｈｎｘ－１００处理后加入到古甲基乙基磺酸盐
ｘ．１的培养基巾培养，其乙醇产量大大提高。ｗｅｄ等用０．１５％的１Ⅵｔｏｎｏ（）渗漏处理Ａｅｕ幽帆，ｎ琊肼帆南ｎｆ＿
ｍ伽Ⅻ后生产苹果酸。ＡｖｃＩｌｉｅｖａ等”１在用＆Ｈｄｆ出ｆ扣ｕｍｗｄ耐步培养生产柠檬酸时，于第二步加人ＤＭ—ｓＯ诱导柠檬酸的合成与分泌，井进行连续化生产研究。
ｚｈｏ“ｇ等”“以ＤＭｓＯ处理ｍ枷ｘ
胞外人参皂甙含量达到１３６ｍｇ／Ｌ。ｃｌ・伍等”将Ｇｗｓ坤ｚｗｍ。小㈣ｚ细胞经ＤＭｓ０渗漏处理后进行固定化
５％）ＤＭｓＯ培养其中培养．迷送香酸（㈣删ｎｉｃａｃ—ｎ现昭ｉｍｍｇ，结果表踢将悬浮细胞在含有１％ＤⅥｓｏ的培养墓中培养，连续培养，棉子酚产量提高３０％．加上诱导子的作用．产率提高２０倍。Ｐａｒｋ等”“先将∞如ｗ扰啪ｎ在低浓度（０．１％）的ＤＭｓＯ中驯化．然后在含有渗漏浓度（０
ｉｄ）的产量犬幅提高．且６５骨以卜分泌到胞外。
２．４用于生物转化
牛乳清中乳糖的利用近年来一直令人关注。Ｂａｃｌ山ａｗａｔ等”用Ｏ．１％ｃ丁ＡＢ处理静止期的足舳觚，渗漏细胞可直接用于乳糖水解。Ｔ０ｍａｓｋａ等“６特用氯仿，乙醇处理后的Ｋｍｎ嗤ｚ咖瑚固定于果胶酸钙后用于乳糖水解。经过５５个批次后乳糖水解率仍然高于８０％，连续生产时水斛率在ｌＩｄ内保持不变。ｓ０Ⅲｋ帅ｎ等利用ｓＤｓ、１ｋｅｅｎ一８０、Ｂ—ｊ３５等对ｓ埔啪印砌螂细胞进行短期渗漏处理，ＴｄｔｏｎＸ．１００和ｓＤｓ在
ｘ．１低浓度（０．０２５％）肘就能使半乳糖苷酶活力提高７～８倍，且不造成细胞溶解。而用尉幻ｎｏｃ）处理的
细胞对乳糖的水解转化率最高（８７％）。将渗漏细胞直接或用琼脂糖凝胶固定化后加＾古５％乳糖的牛奶中，乳糖水解率达到９０％以上。经过处理后细胞在５—６ｈ问处于生长停滞阶段，因此不会在水解乳糖过程中产生乳酸而污染乳制品。ｓｉｓｏ等…、将Ｋ．ｊ础嘛固定于玉米渣后用７０％的乙醇处理，固定化细胞装入填充床反应器进行水解乳糖实验，水解率超过９０％，与未处理的细胞相比乳糖水解速度太大加快，水解程度提高。同时，水解产生的葡萄糖和半乳糖不被渗漏细胞利用，因而可以作为甜味剂或微生物的营养物使用。
嗜甲基酵母（如毕赤酵母、汉逊酵母、杖丝酵母）在有ｑ的条件下，其胞内醇氧化酶（Ａ０ｘａｓｅ）能将甲醇氧化为甲醛，同时产生琏０二。但由于胞内过氧化氢酶的存在（酶括力为醇氧化酶的２００一４００倍），产
万方数据
３８８微生物学报４１卷生的Ｕｑ被立即分解，并不能生成Ｈ。ｑ。用化学通透法有选择性地将Ｐ”ｈｍｊ郴ｆｏ刚细胞中的过氧化氢酶渗出．同时加入过氧化氢酶的选择性抑制香氮化钠．使得婷氧化酶比活力提高了一倍。此外，叠氯化钠的加人还起到了稳定醇氧化酶的作用。利用反法生产Ｈ、０，。最高浓度可达到８０ｍｍｏＩ／Ｌ【ｌ“。
ｕｕ等。。“用己醇和异丙醇处理导人胞内醛酮转移酶的重组ｓｃｅ脚ｕ㈣由丙酮醛合成ｓ一丙醇酰谷胱
５，３甘肽。在４℃下．用４０％乙醇和异丙醇处理１０ｍｉｎ，渗漏细胞产物生成的初速度分别为未经处理的对照细胞的３６４和５８２倍．为使用等量细胞提取的醛酮转移酶时产物生成速度的２
反复使用后仍保持较高的活性。５倍。渗漏细胞经
Ｊ如ｇ等㈨１将ｚｍｏｍｏｎ椰，∞础如经ｃ１ＨＢ处理后，用ｐ拉胶固定化违续生产山梨醇，产量为６．５１酣Ｌ・ｈ，且在３０ｄ的连续生产中无变化。ＲＰｈｒ等将用阳离子睦去污刑ｃ１＇ＡＢ处琊后的ｚ．，加＾矗如在３０％（ｗ，ｖ）的葡萄惦、果糖混台物中连续培养，山梨醇和葡萄糖酸产量均达到２９５一Ｌ。
ｆ讪ｈｕｎｃ等”’将经过ｃＴＡＢ处理后的Ｅ．∞“细胞用戊二醛固定化后包埋ｊ１聚丙烯酰胺中，由青霉索Ｇ酶法生产６一氨基青霉烷酸（６一ＡＰＡ）。转化率达到９５～１００％，转化时间缩短Ｉ／３．固定化细胞使用９０个批次君酶活力无明显损失，ＡⅢ等将７磁ｏｎｏｐ出眦ｒｆｎ榭函和风曲—ｗ眦ｓｓｐ进行渗漏处理后固定于果脏酸钙中由头胞菌隶．ｃ合成７一ＡｃＡ。ｃｈａｎ等旧用Ｏ１％己烷娃理ｃ７阳ｍ∞衄ｎ舳怕ｎＭ，日细胞，由币十五烷生产正十≮烷一１，１３－二羧酸，转化率人大提高。，渗湍细胞固定化后连续生产尉产甜提高４倍。利用Ａ“ｌｂｅｄｉｔｅｘＡＤ，２对正十二烷一１，１３．二投酸一进行原位提取后，蕨方法将可用于大规模生产。
２．５其他
Ｆ叽ａｄｅｚ等”“片ｊ甲苯一己醇破坏＆＾也∞ｎ甜胁Ⅷｙ删ｐｏｍ如的胞内海藻糖池（ｉｎｌｅｒｎ胡他ｈ山ｓｅ
纯酶对乙醇、葡萄糖、乳糖进行酶法分析。ｐ００ｆ），然后通过外加海藻糖研究海藻糖对胞内酶的热稳定作用。经ｃｍＢ渗漏处理后的丘—哪““还被用来替代
Ｒｉｃｈａｒｄｓ等㈦ｏ在进行以磺胺嘧啶作为佐剂增强甲氧苄氮嘧畦对甲氧苄氨嘧啶耐药眭病原菌ｎ￡Ｐｒ０一∞∞ｍ知ｅｍ执４６３杀菌作用的研究中发现，磺胺嘧啶本身并不能对Ｅ．ｍ∞“小４６３产生作用，但却能通过破坏细菌的细胞壁使细胞时甲氧苄氨嘧啶的吸收增加６倍，展终导致细胞ＡＴＰ的释放并发牛超结构损伤而失去耐药性。
３展望
细胞的通遗性改变己被广泛直用，但仍有不完善之处。目前在通透性改变的机理方面研究进展不大，大多数应用还停留存依靠经验和通过实验摸索的阶段。若能对通透剂与细胞壁、膜作用机制有较深人的了解，就可以根据不同的需要选择特定的通透剂厦其作用方式盟强度，避免选择时的盲目性。另外，在通过内源因素（如通过改变基圜组成）实现细胞通透性的盯控涧节方面也有待进一步研究。
参考文献
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ｍ
万方数据 叩ａｋｅｇｈ嘧Ｋ，０ｕｃｂｌＫ』ｎ瑚Ｂ∞８增，１９９５．７９：１１—１６．
３期罗杰：细胞通透性的改变及茛应用３８９
ＡＶ出ｃｖａ
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Ｒ郴ｆ硝ｃｈ…Ｎ曲ｌ删ｎｗ踟ｓ船剐…删Ｊｍ－ｂｎ・＿雌，肌ｖｄ掣一ｆ（９６ｃ０２一∞ｕｏ
（搂３８５页）
６图表中数值的量和单位：用量与单传的比值表示数值，即物理量符号（斜体）与单位（正体）之间用
斜线隔开，如ｆ／ｈ（时『ｕＪ，单位是小时），
７有兰数值带的计量单位不能省略，如３０ｒｍ
．２０℃：１５％一２０％不可写成１５—２０％等。ｘ０５ｃｍ不可写成３０×０５叫ｌ；１５℃一２０℃不可写成１５
参考文献
ｌ文献必须是作者在论文叶１直接引片Ｉ的，最主要的，发表在正式出版物上的文献。
２．未正式发表的文献（包括私人通讯，毕业论文等）一般不作为文献引用．必要时可作为脚注处理。３参考文献的作者不超过３人时全部列出，多于３几叫Ｈ列【ｉ；：『３人，后加“等”字或“样缸”。姓名采
用蛙前名后的形式．外国人姓写仝称，名缩写．作者之间不用“和”字或“ａｎｄ”。外国期刊名可缩写，但必须标准。
例：
『１］ｍ新土．徐毅，刘洪灿，等撇生物学报，１９９７，３７（Ｉ）：ｌ一６
ｌ２ＪＲ吣ｓＨＮＭ．ｃｏⅢｎ８ＭＤ，Ｔ｛ｎｄｄｌＢＪ．“ｎｆ』＆ｎ删ｒｍ６ｒ一．１９８Ｉ，１２３：７５～８０
１５ｌ
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５０ｖ胡删ｌ』耵ａ加１耀：＾Ｌ如∞Ｂ２叼ＭＢ肌刖２月ｄＹ。吐：ｃ乩ｄ枷ｎｇＨⅡｒｂ。Ｉｏ…－ｔｍｖＰＭｇＢ，１９８９，４．３９～４
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２２１—２２９Ｂ舯！ｆｆ瑚ｓ小‘妇Ｉｎ：ＢｕⅡｅｒＬｏ，““．。ｄ＆ｎｅｔｌｃＴ…如珊ａｔｉ彻ａｎｄＥ１畔ＢｓｉｏｎＵＫｍｔｄ℃。印ｔＴｊｍｌｔｅｄｔ１９８９
４．文献应以在文中出现的先后顺序排序，论文一般币超过２０篇，综述不超过２５篇。
万方数据
细胞通透性的改变及其应用
作者：
作者单位：
刊名：
英文刊名：
年，卷(期)：
被引用次数：罗杰华中科技大学生命科学与技术学院微生物学报ACTA NICROBIOLOGICA SINICA2001,41(3)3次
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为ｒ克服由于细胞壁、细胞膜存在而形成的渗透壁障，人们通过物理、化学等方法改变细胞壁、膜的通透性。通过以上处理，渗漏细胞通静仍保持其形态上的完整眭．但由于其细胞壁、膜受到了一定的破坏，其对低分子量物质的渗透障碍被部分或完全解陈。
细胞通透性改娈因不同的微生物类型而有所不同，即使对于同类捌的微生物，也会由于细胞壁、膜的组成和结构不同而有很大差别。另外近胡对地ｎ口ｗ缸ｚ驴ｏｆ”池和跖ｒ。如印。ｒⅡ如阽Ⅲｅ吐ｉ德尔布有孢酵母的研究表明，细胞通透性的改变随菌龄不同，蹙化不大…。改变细胞通透性的方法很多，如超声、冻融、有机溶剂（甲苯、＿二甲亚砜等）、击污剂（如ｃＴＡＢ、Ｒ种ｎ一８０晡ｌｏｌｌｘ．１００等）和螫台剂（如ＥＤＴＡ）处理等。
２应用
２．１用于胞内酶活力的测定
对于胞内酶的测定，以往常采用机械法进行细胞破碎后测定提取液中的酶活力，不但繁琐费时，结果也不甚准确。Ｌａｏｕ８ｒ等研究了包括Ｐｌｕｒｏｎ记Ｆ－６８在内的各种表面活性剂对测定完整ｓ∞螂西“ｗ绁胞中醇脱氢酶活力的影响。Ｇｏｗｄａ等”‘用毛地黄苷处理尉叫晰，。删加ｇ“如，分别测定其胞内醇脱氢酶
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作者简介：罗杰（Ｊ９７Ｉ一），男，２９岁．讲师。收稿日期：２０００．０４一１８．修回日期：２００ｍｌｏ—０８万方数据
３期罗杰：细胞通透性的改变及其应用３８７后提取，存在着如Ｆ缺点：破碎后细胞碎片过多；胞内棱酸物质的释放使提取液牯度大大增加；几乎释散ｒ所有胞内可溶性蛋白质．使杂蛋白质含量过大。近年来．化学通遘法提取胞内蛋白质，酶出其陕速、简便、选择胜强等特点逐渐受到人们的重视，
ＭａｗｌＩｊ等对运用ＥＤＴＡ和热冲击处理￡．∞血提取用质酶（ｐｅｎｐｌａｓｌｎ记ｅｎｚｙｍＰｓ）进行了研究，ｃｈａｍ等用渗逢压冲击结台氯仿／胍处艘扶重组Ｅ蒯ｆ中提取人胱氡酸蛋白酶抑制荆ｃｖａ删ｎ．ｃ。Ｎｏｖｅｌ】ａ“则系统地比较ｆ化学渗橱法，冻融法、超声往对Ｅｃｏ“青霉素酰化酶的提取效率的影响，超声法提取总蛋白含量最高，但纯化系数极低。溶菌酶加ＥＤＴＡ处理后酶活力最高，但纯化系数仍不高。室温ｒ以胍加ＦＤ．ＴＡ处理后酶活力保留８０％，杂蛋白含量侵低．纯化系数钺高。
Ｌｕｌｚｅ√“将化学通透与高压匀浆相结合，提取胞内蛋白质取得了较好的效果。最近Ｆ甜ｃｏｎｅｒ等用ＥＤ．ＴＡ（Ｏ．３ｍｍ枷Ｌ）和脲（６ｍｕｌ，Ｌ）处理Ｅ．ｆｏ雎细胞，３０ｍｊｎ内几１乎１００％的＿ｕｊ溶性蛋白释放到胞外。目前对于古有重组蛋白的Ｆ．ｏ诫细胞的化学通透研究正在进行中。ＮａＲＩ“等“在实际发酵条件下对Ｆ…“生＆和胞内蛋白释放的研究表明：Ｏ４ｍ０１，Ｉ胍与０５％Ｔｄｔｏｎｘ－１００连用，１ｈ内可释放７５％的胞内蛋白．除去溶剂后细胞生长仍口ｒ得到恢复。ＧｅｈＩＩＩｌｉｃｌｌ等”’将重组Ｅ
理．经微滤得到链激酶。酶收率８２％．纯度４６％。
ｖ；ｎａ等”曲￡ｒ。ｉｉ和Ｂｃｏ矗细胞琼干后用胍，盐酸、ｎｌ。ｎｘ，ｌｏｏ处ｓｕ＆ｆ“＂中导人来自ｍｍ＾∥矗ｎ蚰卅＾㈣ｈ￡ｉｃｎ的具有融菌作用的葡聚糖酶基因。Ｐａｒｋ等”利用基因丁程技术破坏ｓ㈣函ｚ舯中与细胞壁形成有关的ＫＮＲ４基因，重组细胞的通透性明显提高，可用于进行外源篮［Ｊ质的生产。Ｆ１ｅｅｒ等将带自破坏掉ＰＤＲｌ、ＥＧＲ４基因的质粒导人ｓｃ竹删“ｍｅ中替换原来的正常基因，重组细胞用于牛物活性物质的筛选、生物催化和代谢途径研究。
２．３增加代谢产物的分泌
Ｔａｋｅ出霄ｅ等”’将静止期的ｓ柙州ｂｔ啪用甲苯、已醇和ｒｒｈｎｘ－１００处理后加入到古甲基乙基磺酸盐
ｘ．１的培养基巾培养，其乙醇产量大大提高。ｗｅｄ等用０．１５％的１Ⅵｔｏｎｏ（）渗漏处理Ａｅｕ幽帆，ｎ琊肼帆南ｎｆ＿
ｍ伽Ⅻ后生产苹果酸。ＡｖｃＩｌｉｅｖａ等”１在用＆Ｈｄｆ出ｆ扣ｕｍｗｄ耐步培养生产柠檬酸时，于第二步加人ＤＭ—ｓＯ诱导柠檬酸的合成与分泌，井进行连续化生产研究。
ｚｈｏ“ｇ等”“以ＤＭｓＯ处理ｍ枷ｘ
胞外人参皂甙含量达到１３６ｍｇ／Ｌ。ｃｌ・伍等”将Ｇｗｓ坤ｚｗｍ。小㈣ｚ细胞经ＤＭｓ０渗漏处理后进行固定化
５％）ＤＭｓＯ培养其中培养．迷送香酸（㈣删ｎｉｃａｃ—ｎ现昭ｉｍｍｇ，结果表踢将悬浮细胞在含有１％ＤⅥｓｏ的培养墓中培养，连续培养，棉子酚产量提高３０％．加上诱导子的作用．产率提高２０倍。Ｐａｒｋ等”“先将∞如ｗ扰啪ｎ在低浓度（０．１％）的ＤＭｓＯ中驯化．然后在含有渗漏浓度（０
ｉｄ）的产量犬幅提高．且６５骨以卜分泌到胞外。
２．４用于生物转化
牛乳清中乳糖的利用近年来一直令人关注。Ｂａｃｌ山ａｗａｔ等”用Ｏ．１％ｃ丁ＡＢ处理静止期的足舳觚，渗漏细胞可直接用于乳糖水解。Ｔ０ｍａｓｋａ等“６特用氯仿，乙醇处理后的Ｋｍｎ嗤ｚ咖瑚固定于果胶酸钙后用于乳糖水解。经过５５个批次后乳糖水解率仍然高于８０％，连续生产时水斛率在ｌＩｄ内保持不变。ｓ０Ⅲｋ帅ｎ等利用ｓＤｓ、１ｋｅｅｎ一８０、Ｂ—ｊ３５等对ｓ埔啪印砌螂细胞进行短期渗漏处理，ＴｄｔｏｎＸ．１００和ｓＤｓ在
ｘ．１低浓度（０．０２５％）肘就能使半乳糖苷酶活力提高７～８倍，且不造成细胞溶解。而用尉幻ｎｏｃ）处理的
细胞对乳糖的水解转化率最高（８７％）。将渗漏细胞直接或用琼脂糖凝胶固定化后加＾古５％乳糖的牛奶中，乳糖水解率达到９０％以上。经过处理后细胞在５—６ｈ问处于生长停滞阶段，因此不会在水解乳糖过程中产生乳酸而污染乳制品。ｓｉｓｏ等…、将Ｋ．ｊ础嘛固定于玉米渣后用７０％的乙醇处理，固定化细胞装入填充床反应器进行水解乳糖实验，水解率超过９０％，与未处理的细胞相比乳糖水解速度太大加快，水解程度提高。同时，水解产生的葡萄糖和半乳糖不被渗漏细胞利用，因而可以作为甜味剂或微生物的营养物使用。
嗜甲基酵母（如毕赤酵母、汉逊酵母、杖丝酵母）在有ｑ的条件下，其胞内醇氧化酶（Ａ０ｘａｓｅ）能将甲醇氧化为甲醛，同时产生琏０二。但由于胞内过氧化氢酶的存在（酶括力为醇氧化酶的２００一４００倍），产
万方数据
３８８微生物学报４１卷生的Ｕｑ被立即分解，并不能生成Ｈ。ｑ。用化学通透法有选择性地将Ｐ”ｈｍｊ郴ｆｏ刚细胞中的过氧化氢酶渗出．同时加入过氧化氢酶的选择性抑制香氮化钠．使得婷氧化酶比活力提高了一倍。此外，叠氯化钠的加人还起到了稳定醇氧化酶的作用。利用反法生产Ｈ、０，。最高浓度可达到８０ｍｍｏＩ／Ｌ【ｌ“。
ｕｕ等。。“用己醇和异丙醇处理导人胞内醛酮转移酶的重组ｓｃｅ脚ｕ㈣由丙酮醛合成ｓ一丙醇酰谷胱
５，３甘肽。在４℃下．用４０％乙醇和异丙醇处理１０ｍｉｎ，渗漏细胞产物生成的初速度分别为未经处理的对照细胞的３６４和５８２倍．为使用等量细胞提取的醛酮转移酶时产物生成速度的２
反复使用后仍保持较高的活性。５倍。渗漏细胞经
Ｊ如ｇ等㈨１将ｚｍｏｍｏｎ椰，∞础如经ｃ１ＨＢ处理后，用ｐ拉胶固定化违续生产山梨醇，产量为６．５１酣Ｌ・ｈ，且在３０ｄ的连续生产中无变化。ＲＰｈｒ等将用阳离子睦去污刑ｃ１＇ＡＢ处琊后的ｚ．，加＾矗如在３０％（ｗ，ｖ）的葡萄惦、果糖混台物中连续培养，山梨醇和葡萄糖酸产量均达到２９５一Ｌ。
ｆ讪ｈｕｎｃ等”’将经过ｃＴＡＢ处理后的Ｅ．∞“细胞用戊二醛固定化后包埋ｊ１聚丙烯酰胺中，由青霉索Ｇ酶法生产６一氨基青霉烷酸（６一ＡＰＡ）。转化率达到９５～１００％，转化时间缩短Ｉ／３．固定化细胞使用９０个批次君酶活力无明显损失，ＡⅢ等将７磁ｏｎｏｐ出眦ｒｆｎ榭函和风曲—ｗ眦ｓｓｐ进行渗漏处理后固定于果脏酸钙中由头胞菌隶．ｃ合成７一ＡｃＡ。ｃｈａｎ等旧用Ｏ１％己烷娃理ｃ７阳ｍ∞衄ｎ舳怕ｎＭ，日细胞，由币十五烷生产正十≮烷一１，１３－二羧酸，转化率人大提高。，渗湍细胞固定化后连续生产尉产甜提高４倍。利用Ａ“ｌｂｅｄｉｔｅｘＡＤ，２对正十二烷一１，１３．二投酸一进行原位提取后，蕨方法将可用于大规模生产。
２．５其他
Ｆ叽ａｄｅｚ等”“片ｊ甲苯一己醇破坏＆＾也∞ｎ甜胁Ⅷｙ删ｐｏｍ如的胞内海藻糖池（ｉｎｌｅｒｎ胡他ｈ山ｓｅ
纯酶对乙醇、葡萄糖、乳糖进行酶法分析。ｐ００ｆ），然后通过外加海藻糖研究海藻糖对胞内酶的热稳定作用。经ｃｍＢ渗漏处理后的丘—哪““还被用来替代
Ｒｉｃｈａｒｄｓ等㈦ｏ在进行以磺胺嘧啶作为佐剂增强甲氧苄氮嘧畦对甲氧苄氨嘧啶耐药眭病原菌ｎ￡Ｐｒ０一∞∞ｍ知ｅｍ执４６３杀菌作用的研究中发现，磺胺嘧啶本身并不能对Ｅ．ｍ∞“小４６３产生作用，但却能通过破坏细菌的细胞壁使细胞时甲氧苄氨嘧啶的吸收增加６倍，展终导致细胞ＡＴＰ的释放并发牛超结构损伤而失去耐药性。
３展望
细胞的通遗性改变己被广泛直用，但仍有不完善之处。目前在通透性改变的机理方面研究进展不大，大多数应用还停留存依靠经验和通过实验摸索的阶段。若能对通透剂与细胞壁、膜作用机制有较深人的了解，就可以根据不同的需要选择特定的通透剂厦其作用方式盟强度，避免选择时的盲目性。另外，在通过内源因素（如通过改变基圜组成）实现细胞通透性的盯控涧节方面也有待进一步研究。
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６图表中数值的量和单位：用量与单传的比值表示数值，即物理量符号（斜体）与单位（正体）之间用
斜线隔开，如ｆ／ｈ（时『ｕＪ，单位是小时），
７有兰数值带的计量单位不能省略，如３０ｒｍ
．２０℃：１５％一２０％不可写成１５—２０％等。ｘ０５ｃｍ不可写成３０×０５叫ｌ；１５℃一２０℃不可写成１５
参考文献
ｌ文献必须是作者在论文叶１直接引片Ｉ的，最主要的，发表在正式出版物上的文献。
２．未正式发表的文献（包括私人通讯，毕业论文等）一般不作为文献引用．必要时可作为脚注处理。３参考文献的作者不超过３人时全部列出，多于３几叫Ｈ列【ｉ；：『３人，后加“等”字或“样缸”。姓名采
用蛙前名后的形式．外国人姓写仝称，名缩写．作者之间不用“和”字或“ａｎｄ”。外国期刊名可缩写，但必须标准。
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４．文献应以在文中出现的先后顺序排序，论文一般币超过２０篇，综述不超过２５篇。
万方数据
细胞通透性的改变及其应用
作者：
作者单位：
刊名：
英文刊名：
年，卷(期)：
被引用次数：罗杰华中科技大学生命科学与技术学院微生物学报ACTA NICROBIOLOGICA SINICA2001,41(3)3次
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